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小鼠肝星狀細胞永生化細胞專用培養基操作步驟

** 細胞傳代與凍存**

當細胞密度達到80%-90%時即可進行傳代。棄去舊培養基，用預熱的PBS輕柔洗滌兩次，加入0.25%（含EDTA）消化1-2分鐘。鏡下觀察細胞變圓后，立即加入含血清的培養基終止消化，輕柔吹打形成單細胞懸液。離心（1000rpm, 5分鐘）后棄上清，用新鮮培養基重懸細胞，按1:2至1:3比例分瓶培養。

**質量控制要點**

* **形態觀察：** 永生化肝星狀細胞應呈現長梭形或多角形，胞質豐富，核仁明顯。若出現細胞變圓、脫落或大量空泡，提示培養條件異常。

* **生長曲線：** 定期繪制生長曲線，監測細胞增殖速率。異常增殖或停滯可能表明培養基失效或細胞污染。

* **功能驗證：** 建議定期通過α-SMA免疫熒光染色或膠原分泌檢測驗證細胞活化狀態，確保其保持星狀細胞特性。

**7. 注意事項**

* **無菌操作：** 所有操作需在超凈臺中進行，避免污染。

* **培養基保存：** 培養基4℃保存不超過2周，避免反復凍融。

* **細胞狀態：** 永生化細胞雖可長期培養，但建議定期更換新鮮凍存細胞，避免遺傳漂變。

* **實驗記錄：** 詳細記錄培養基批次、細胞代數和實驗條件，確保實驗可重復性。

**8. 常見問題與解決方案**

* **細胞貼壁不良：** 檢查培養瓶是否經過包被，或增加血清濃度至15%。

* **增殖緩慢：** 確認培養基新鮮度，或嘗試添加2mM L。

* **污染處理：** 立即丟棄污染細胞，消毒培養環境，啟用新批次培養基。

（注：具體操作參數可根據實驗室條件和細胞株特性進行優化。）

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