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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：F-actin Staining Kit (Orange Fluorescence)

產(chǎn)品中文名稱：F-actin染色試劑盒（橙色熒光）

規(guī)格：50 T/300 T/1000 T

貨號(hào)：EY-01X8561
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢:

•  優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)方案，特別適用于甲醛固定與透化處理的組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)物或無細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的F-actins標(biāo)記，鑒定以及定量需求。

•  的鬼筆環(huán)肽染料 (橙色熒光) (Ex/Em = 593/614nm)，特異性地結(jié)合F-actins，且兼具比其它熒光素-鬼筆環(huán)肽偶聯(lián)物更強(qiáng)的光穩(wěn)定性。

保存建議:請(qǐng)參閱說明書中各個(gè)組分的存儲(chǔ)條件。自發(fā)貨之日起，在推薦溫度下至少穩(wěn)定6個(gè)月。

運(yùn)輸條件:藍(lán)冰運(yùn)輸

背景

鬼筆環(huán)肽（phalloidin），是從一種劇毒磨菇(Amanita phalloides)中分離出來的一種多肽物質(zhì)，屬于毒傘肽類毒素，是一種強(qiáng)烈毒素。它是一種特異性結(jié)合F-肌動(dòng)蛋白的雙環(huán)肽，因此，使用熒光染料偶聯(lián)的鬼筆環(huán)肽可以非常方便地研究F-actins的分布。在鬼筆環(huán)肽內(nèi)部，半和之間存在不尋常的硫醚橋，可形成內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu)。當(dāng)pH升高時(shí)，硫醚被裂解，鬼筆環(huán)肽喪失對(duì)肌動(dòng)蛋白的親和力。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時(shí),無需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

ADM (Adrenomedullin 0.1mgADM (Adrenomedullin)(22-52) 腎上腺髓質(zhì)素(22-52)

IL13 Protein Human 重組人 IL13 / ALRH 蛋白

HSPD1重組小鼠 HSPD1 / HSP60 蛋白 Protein

IL13RA2 Protein Rat 重組大鼠 IL13RA2 / IL13R 蛋白

MET重組人 c-MET / HGFR 蛋白 (aa 956-1390, His & GST 標(biāo)簽) Protein

豚鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)檢測試劑盒 ，英文名： ECF ELISA Kit

Human blocking aibody (BA) ELISA Kit 人封閉抗體(BA)檢測試劑盒

rabbitsolubleE-selectin,sE-selectinELISAKit 兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBB-Ab(Humanai-Bburgdorleriaibody)ELISAKit人抗BB抗體

酰胺水解活力(AMINOLYTIC)檢測試劑盒20次

RabbitCollagenaseIELISAKit兔子膠原酶I(CollagenaseI)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

神經(jīng)生長因子   英文名稱：    nerve growth factor    規(guī)格：      英文縮寫：   NGF

神經(jīng)生長因子受體   英文名稱：    nerve growth factor  receptor   規(guī)格：      英文縮寫：   NGFR

中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)性載脂蛋白   英文名稱：   Neuophil gelatinase-associated lipocalin   規(guī)格：      英文縮寫：   NGAL

神經(jīng)營養(yǎng)素3   英文名稱：   Neuroophin-動(dòng)?動(dòng)

大鼠T細(xì)胞活化核因子5(NFAT5)檢測試劑盒 ，英文名： NFAT5 ELISA Kit

Mice of low density lipoprotein immune complexes (LDL-IC) ELISA Kit 小鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)檢測試劑盒

ELISA 小鼠性激素結(jié)合球蛋白(mouse SHBG)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforIGFBP-1(MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein1)ELISAKit小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1

通用型牛新孢子蟲病(Neosporacaninum)試劑盒20次

ELISAKitCYP2E1大鼠細(xì)胞色素P4502E1

F-actin染色試劑盒（橙色熒光）TNFSF10重組小鼠 TNFSF10 / TRAIL / APO-2L 蛋白 (aa 118-291, His 標(biāo)簽) Protein

叉頭框蛋白O1(FOXO1)重組蛋白 Recombinant Forkhead Box Protein O1 (FOXO1)

SIGIRR重組人 SIGIRR / TIR8 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

IL13 Protein Human 重組人 IL13 / ALRH 蛋白

IL8 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL-8 / CXCL8 蛋白