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產品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產品英文名稱：Human Leptin Protein

產品中文名稱：重組人瘦素蛋白

規(guī)格：100 μg/1 mg

貨號：EY-01X8721
用途：僅供科研研究實驗

特點&優(yōu)勢:

標簽:無標簽

表達宿主:大腸桿菌

種屬:人

序列:氨基酸序列來源于：人源Leptin (Val22-Cys167)表達的蛋白片段。

蛋白長度：由146個氨基酸組成，預測分子量為16 KD。

純度:> 98 % ，使用SDS-PAGE檢測

采用 LAL 法檢測，每 1 μg 蛋白質中的 EU 含量小于 1.0。

產品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無菌的 PBS，pH 7.5。

基因ID:3952

使用中注意事項:開蓋使用前，請先離心。本產品為凍干粉，推薦用該產品配套的Reconstitution 動?動

背景

瘦素是脂肪組織分泌的一種激素，其在血清中的含量與動物脂肪組織的大小成正比。它作用于位于中樞神經系統(tǒng)的瘦素受體，調節(jié)生物體的行為和代謝。當體脂減少或處于低能量狀態(tài)(如饑餓)時，血清中瘦素含量會顯著降低，從而刺激覓食行為，降低自身能量消耗。

本產品具有下列特點:

1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
公司正在出售的產品：

CCR-1(CC chemokine receptor 1 0.5mgCCR-1(CC chemokine receptor 1) 細胞表面趨化因子受體1抗原

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CD63 Protein Rat 重組大鼠 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 蛋白

PTPMT1重組人 PTPMT1 蛋白 Protein

小鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA 試劑盒 96T/48T

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Humanβ-lipoopichormone,β-LPHELISAKit 人β-促脂素(β-LPH)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenGlucagon,GC檢測試劑盒雞胰高血糖素(GC)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞CASPASE-7蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

Mousehemeoxygenase2,HO-2ELISAKit小鼠血紅素氧合酶2(HO-2)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠血管緊張素轉化酶檢測試劑盒   小鼠血管緊張素轉化酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠血管緊張素轉化酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠血管緊張素轉化酶試劑盒、小鼠血管緊張素轉化酶檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

小鼠血管緊張素原檢測試劑盒   小鼠血管緊張素原試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠血管緊張素原試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠血管緊張素原試劑盒、小鼠血管動?動

大鼠蛋白激酶G(PKG)檢測試劑盒 ，英文名： PKG ELISA Kit

Pig angiopoietin 2 (ANG-2) ELISA Kit 豬血管生成素2(ANG-2)檢測試劑盒

病毒H5亞型核酸檢測試劑盒(熒光PCR法) 48T

CLIAKitforLPS(HumanLipopolysaccharides)ELISAKit人脂多糖/內毒素

通用免疫化學固著溶液10毫升

ELISAKitPPP雞蛋卵黃高0蛋酸肽

重組人瘦素蛋白BSG重組小鼠 CD147 / EMMPRIN / Basigin 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

CCR-1(CC chemokine receptor 1 0.5mgCCR-1(CC chemokine receptor 1) 細胞表面趨化因子受體1抗原

PTPMT1重組人 PTPMT1 蛋白 Protein

CD93 Protein Human 重組人 CD93 / C1QR1 蛋白

CD63 Protein Rat 重組大鼠 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 蛋白

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環(huán)獲得產物。

(二)構建重組表達載體

1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達質粒的表達菌種

1、 將連接產物轉化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。

3、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。

(四)誘導表達

1、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。