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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠嗅鞘細(xì)胞

英文名稱(chēng)：Rat Olfactory Ensheathing Cells

組織來(lái)源：嗅球組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

大鼠嗅鞘分離自嗅球組織；嗅鞘細(xì)胞（OECs）是在功能上介于施旺細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞之間的一種特殊的膠質(zhì)細(xì)胞，具有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)、抑制膠質(zhì)增生、瘢痕形成、成鞘作用等；為軸突生長(zhǎng)提供了適宜的微環(huán)境及較強(qiáng)的遷移的特性，使其成為促進(jìn)中樞神經(jīng)再生的理想候選細(xì)胞之一。嗅鞘細(xì)胞是目前所發(fā)現(xiàn)的極少數(shù)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)可以再生細(xì)胞之一，其特點(diǎn)為終身具有神經(jīng)再生功能，還能夠釋放多種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、神經(jīng)粘附分子。被認(rèn)為是髓鞘化能力強(qiáng)的膠質(zhì)細(xì)胞，逐漸用于治療脊髓損傷。嗅鞘細(xì)胞與膠質(zhì)細(xì)胞、雪旺細(xì)胞在表現(xiàn)型上有共同點(diǎn)，它們都能促進(jìn)軸突的再生，主要區(qū)別在于嗅鞘細(xì)胞不但存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，也存在于外周神經(jīng)中。嗅鞘細(xì)胞被認(rèn)為是一種可塑性很高的細(xì)胞，它可表現(xiàn)出多種細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞表面標(biāo)志，在嗅系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中，嗅鞘細(xì)胞根據(jù)其在組織定位的不同而有不同的抗原表型，其中P75NTR、GFAP、和O4可標(biāo)記大部分在體嗅鞘細(xì)胞，然而在嗅球外神經(jīng)層O4陽(yáng)性嗅鞘細(xì)胞仍然可以在P75NTR陽(yáng)性細(xì)胞層內(nèi)分化成E-NCAM陽(yáng)性的細(xì)胞層，還有一定比率的嗅鞘細(xì)胞P75NTR陰性而NY和S100表型為陽(yáng)性。嗅黏膜中的神經(jīng)元是生后才生長(zhǎng)并在成年時(shí)繼續(xù)分化的神經(jīng)元，壽命為4-12周，隨著新細(xì)胞的生長(zhǎng)，又建立了新的神經(jīng)支配關(guān)系。嗅鞘細(xì)胞存在于嗅神經(jīng)及嗅球的神經(jīng)層上，沿嗅神經(jīng)的全長(zhǎng)，從周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)到中樞神經(jīng)分布。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠嗅鞘采用-膠原酶聯(lián)合消化法、結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠嗅鞘經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類(lèi)型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi)，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠小白蛋白(PVALB)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： PVALB ELISA Kit

Pla vitamin B6 (VB6) ELISA Kit 植物B6(VB6)檢測(cè)試劑盒

MouseProstaglandinE2,PG-E2ELISAKit 小鼠前列腺素E2(PGE2)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanai-cailage-aibodyELISAKit人抗軟骨抗體

細(xì)胞GSK3β激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitLH大鼠促黃體激素

CTSL1重組人 Cathepsin L1 / CTSL1 蛋白 Protein

內(nèi)皮脂肪酶(LIPG)重組蛋白 Recombinant Lipase, Endothelial (LIPG)

PILRA重組人 PILR-alpha / PILRA 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CD5L Protein Human 重組人 CD5L / API6 蛋白

NP Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) Nucleocapsid / NP

內(nèi)皮脂肪酶(LIPG)重組蛋白 Recombinant Lipase, Endothelial (LIPG)

CD5L Protein Human 重組人 CD5L / API6 蛋白

CTSL1重組人 Cathepsin L1 / CTSL1 蛋白 Protein

NP Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) Nucleocapsid / NP

PILRA重組人 PILR-alpha / PILRA 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

小鼠血管活性腸肽(VIP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human granulocyte chemotactic protein -2 (GCP-2/CXCL6) ELISA Kit 人粒細(xì)胞趨化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)檢測(cè)試劑盒

Humandermatansulfate,DSELISAKit 人硫酸皮膚素(DS)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Chicken1,3-βDglucosidase,1,3-βD-Glu檢測(cè)試劑盒雞1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

遠(yuǎn)西方雜交(FARWESTERNBLOT)印跡同位素檢測(cè)試劑盒5次

MouseIgGELISAKit小鼠IgG檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠嗅鞘細(xì)胞小鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血纖蛋白原(Fbg)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血栓素B2(TXB2)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血栓素A2（TXA2）檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用