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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

人口腔黏膜成纖維分離自口腔黏膜組織；口腔各壁都有黏膜覆蓋，口腔黏膜在組織學上由上皮和固有層組成，并借黏膜下層與深部組織相連。口腔黏膜的前方與唇部皮膚相連，后面與咽部黏膜相延續(xù)，是消化道的前端，因此其結(jié)構(gòu)和功能具有皮膚和消化道黏膜的某些特點。人口腔黏膜成纖維主要來自口腔黏膜固有層組織。成纖維細胞是結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介：

實驗室分離的人口腔黏膜成纖維采用 - 膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的人口腔黏膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人口腔黏膜成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

豬褪黑素(MT/MLT)檢測試劑盒

Human tissue inhibitors of metalloproteinase 1 (TIMP-1) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)檢測試劑盒

GuineaPiglipidperoxlde,LPOELISAKit 豚鼠過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforANKRD1(Humancardiacankyriepeatdomain1)ELISAKit人心肌錨蛋白重復域1

血液超氧化物陰離子比色法定量檢測試劑盒20次

Porcinegasieceptor,GsaRELISAKit豬促胃液素受體(GsaR)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

IL5重組狗 IL5 蛋白 Protein

OPG(Osteoprotegerin 0.5mgOPG(Osteoprotegerin) 護骨素(多肽抗原)

AGER重組人 AGER / RAGE 蛋白 (Fc 標簽) Protein

KCT2 Protein Human 重組人 KCT2 / C5orf15 蛋白

CNTF Protein Mouse 重組小鼠 CNTF / Ciliary Neurotrophic Factor 蛋白

OPG(Osteoprotegerin 0.5mgOPG(Osteoprotegerin) 護骨素(多肽抗原)

KCT2 Protein Human 重組人 KCT2 / C5orf15 蛋白

IL5重組狗 IL5 蛋白 Protein

CNTF Protein Mouse 重組小鼠 CNTF / Ciliary Neurotrophic Factor 蛋白

AGER重組人 AGER / RAGE 蛋白 (Fc 標簽) Protein

豚鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat vascular endothelial cell growth factor (VEGF) ELISA Kit 大鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)檢測試劑盒

HumanLactoferrinaibodyIgG,LF/LTFAb-IgGELISAkit 人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白抗體IgG(LF/LTFAb-Ig)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCystatinC,Cys-C檢測試劑盒人半胱蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織HHV6(HUMANHERPESVIRUS6)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次

HumanpodocinELISAKit人Podocin檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人口腔黏膜成纖維細胞人原卟啉原氧化酶(PPOX)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human PPOX (Protoporphyrinogen Oxidase) ELISA Kit

人堿性唾液脯酸豐富蛋白1(PRB1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human PRB1 (Basic Salivary Proline Rich Protein 1) ELISA Kit

人叉頭框蛋白C1(FOXC1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human FOXC1 (Forkhead Box Protein C1) ELISA Kit

人叉頭框蛋白O1(FOXO1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human FOXO1 (Forkhead Box Protein O1) ELISA Kit