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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮分離自眼球脈絡(luò)膜組織；脈絡(luò)膜在視網(wǎng)膜和鞏膜之間，含有豐富血管和色素細(xì)胞，對外力沖擊的耐受性較視網(wǎng)膜差，當(dāng)眼球受到從前面來的外力的沖擊作用通過玻璃體傳到后極部時，堅硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用，使脈絡(luò)膜在內(nèi)外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。脈絡(luò)膜呈暗褐色，圍繞視神經(jīng)乳頭部有照膜，為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡(luò)膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜，由纖維組織、小血管和毛細(xì)血管組成，軟而薄，棕紅色，在鞏膜和視網(wǎng)膜之間，續(xù)連于睫狀體后方。脈絡(luò)膜的血循環(huán)營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層，其含有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層及玻璃體，并有遮光作用，使反射的物象清楚。同時對視覺系統(tǒng)起保護(hù)作用，對整個視覺神經(jīng)有調(diào)節(jié)作用。續(xù)連于睫狀體后方，含豐富的血管和色素細(xì)胞，有營養(yǎng)和遮光作用。

方法簡介：

公司實驗室分離的人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮采用膠原酶-混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子4(-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子3(-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子神經(jīng)生長因子(NGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠白血病抑制因子(LIF)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat heat shock protein 20 (HSP-20) ELISA Kit 大鼠熱休克蛋白20(HSP-20)試劑盒

Humanglucokinaseregulatoryprotein,GKRPELISAKit 人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GKRP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanC-typenaiureticpeptide,CNP試劑盒人C型尿肽(CNP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物組織質(zhì)膜(plasmamembrane)分離試劑盒20次

Humansolubletumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand,sAILELISAKit人可溶性壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sAIL)試劑盒規(guī)格：96T/48T

ROR1重組人 ROR1 蛋白 (aa 453-783, His & GST 標(biāo)簽) Protein

solute carrier family 1 溶質(zhì)攜帶物家族-1(抗原 0.5mgsolute carrier family 1 溶質(zhì)攜帶物家族-1(抗原)

SPP1重組人 Osteopontin / SPP1 / ETA-1 蛋白 Protein

GALNT10 Protein Human 重組人 GALNT10 / GalNAc-T10 蛋白

PDCD1LG2 Protein Human 重組人 B7-DC / PD-L2 / CD273 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

solute carrier family 1 溶質(zhì)攜帶物家族-1(抗原 0.5mgsolute carrier family 1 溶質(zhì)攜帶物家族-1(抗原)

GALNT10 Protein Human 重組人 GALNT10 / GalNAc-T10 蛋白

ROR1重組人 ROR1 蛋白 (aa 453-783, His & GST 標(biāo)簽) Protein

PDCD1LG2 Protein Human 重組人 B7-DC / PD-L2 / CD273 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

SPP1重組人 Osteopontin / SPP1 / ETA-1 蛋白 Protein

人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞大鼠纖維蛋白肽B(FPB)試劑盒 ，英文名： FPB ELISA Kit

Mouse chorionic gonadoopin (CG) ELISA Kit 小鼠絨毛膜(CG)試劑盒

Mousemaixmetalloproteinase5,MMP-5ELISAKit 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHuman2,3-dinohromboxaneB2,2,3-dinor-TXB2ELISAKit人2,3Dinor血栓烷B2

細(xì)胞HSV(HERPESSIMPLX)病毒定性試劑盒20次

ELISAKitEGF大鼠表皮生長因子