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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠枯否分離自肝臟組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官，并在身體里面起著去氧化、儲(chǔ)存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里大的器官，位于機(jī)體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。枯否氏細(xì)胞(Kupffer細(xì)胞)是肝臟的肝血竇內(nèi)一些固定于竇壁的巨噬細(xì)胞，它能吞噬和清除大部分從腸道來的抗原微粒，并能吞噬和清除肝血竇中的細(xì)菌、異物和衰老的紅細(xì)胞，并把血紅蛋白分解成。此外，肝巨噬細(xì)胞也有處理抗原，誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖，參與免疫調(diào)節(jié)的作用。枯否氏細(xì)胞和一般巨噬細(xì)胞不同，枯否氏細(xì)胞不具有增加抗原免疫原性的能力，相反有消除或減弱抗原性的作用。枯否氏細(xì)胞能吞噬來自血液循環(huán)的抗原抗體復(fù)合物和其他有害物質(zhì)，以消除這些物質(zhì)對(duì)機(jī)體的損害。枯否細(xì)胞功能障礙可導(dǎo)致腸源性內(nèi)毒素血癥。電鏡下有很多皺褶和微絨毛。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝枯否采用混合酶灌流消化、低速離心、密度梯度離心、差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝枯否經(jīng)CD68免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、巨噬細(xì)胞

傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液 （12mM）

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠脂素1(LPIN1)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： LPIN1 ELISA Kit

Mouse soluble leptin receptor (sLR) ELISA Kit 小鼠可溶性瘦素受體(sLR)檢測(cè)試劑盒

MouseGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISAKit 小鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforhumanHMGB-1ELISAKit人高遷移率族蛋白B1ELISAKit

B2高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitGDNF大鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子

TSPAN1重組人 TSPAN1 蛋白 (aa 110-211, Fc 標(biāo)簽) Protein

Sox2 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白 0.5mgSox2 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白

EFNB1重組人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

CSF2 Protein Human 重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白

PLAU Protein Human 重組人 Urokinase / PLAU 蛋白

Somatostatin/GRIH 抗原 0.5mgSomatostatin/GRIH 抗原

CSF2 Protein Human 重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白

TMEM25重組人 TMEM25 蛋白 Protein

PIGR Protein Human 重組人 PIGR 蛋白 (365 Ser/Gly, His 標(biāo)簽)

EFNB2重組人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

小鼠皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CO)ELISA 試劑盒 96T/48T

Prothrombin fragme F1+2 (F1+2) ELISA Kit 人原片段F1+2(F1+2)檢測(cè)試劑盒

HumanCollagenaoaibody,CLAELISAKit 人抗膠原蛋白抗體(CLA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Human1,3-Disphosphoglycerate,1,3-DPG檢測(cè)試劑盒人1,3-二0酸甘油酸(1,3-DPG)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞線粒體粗提分離試劑盒10次

MouseAzidothymidine,AZTELISAKit小鼠(AZT)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠肝枯否細(xì)胞小鼠類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1(mouse IGFBP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-2(mouse IGBPF-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3(mouse IGBPF-3)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠IgA(mouse IgA)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝